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ELISA常見封閉液簡介

發(fā)布時間: 2022-11-21  點(diǎn)擊次數(shù): 2385次
不同的實(shí)驗(yàn)中我們都會遇到封閉液,像常規(guī)的ELISA實(shí)驗(yàn)中封閉液也是不可queshao的,那讓我們來看看哪些是ELISA實(shí)驗(yàn)中常見的吧!
     ELISA的試劑盒說明上寫封閉液用蔗糖溶液,一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封閉空白位點(diǎn),蔗糖封閉的原理:
  • ELISA實(shí)驗(yàn)中,蔗糖本身沒有封閉作用;
  • 封閉液一般是BSA(牛血清白蛋白)、脫脂奶粉、酪蛋白、明膠等或者是Tween-20(0.05 - 0.1%)稀溶液PBST或者TBST等。
  • 加蔗糖的主要目的是保護(hù)ELISA板子吸附(包被)的蛋白,起到“保護(hù)劑”的作用。
  • 蔗糖溶液一般在ELISA板子經(jīng)過BSA封閉后加,當(dāng)然也有將蔗糖加到封閉液中同時進(jìn)行處理;那一種更好需要你實(shí)驗(yàn)后來驗(yàn)證。但多數(shù)選擇前者。
除此外,封閉劑還可用5%的脫脂乳,0.4%的明膠,但是實(shí)驗(yàn)表明前者比較好,后者不容易洗干凈未結(jié)合上的明膠。
  • SA是常用的封閉劑,成分單一適用于大多數(shù)情況。若免疫原是偶聯(lián)BSA的, BSA有很強(qiáng)的免疫原性,會導(dǎo)致產(chǎn)生很多的針對BSA的抗體,為避免交叉反應(yīng),不能用BSA、脫脂奶粉等封閉,可以選用酪蛋白或無蛋白的封閉劑封閉。大部分BSA中有少量的抗體殘留,會導(dǎo)致抗原/抗體之間的交叉反應(yīng),產(chǎn)生高背景,雜帶較多或使得本底水平增高。

  • 封閉血清的原理主要有兩點(diǎn),一是待檢樣本會有些與蛋白非特異性結(jié)合的物質(zhì),從而導(dǎo)致背景過高,因此可以用BSA或血清封閉掉這部分非特異性的結(jié)合,從這點(diǎn)看,BSA和血清沒有明顯區(qū)別。二是待檢樣本中可能會有Fc受體,可以和抗體恒定區(qū)結(jié)合,與抗體特異性無關(guān),封閉血清中有抗體,因此用血清可以封閉掉一抗及二抗和樣本Fc受體之間結(jié)合。BSA則無法封閉Fc受體。

  • 脫脂奶粉的優(yōu)點(diǎn)是價錢便宜,但是由于成分相對復(fù)雜,所以適用范圍要狹窄一些。磷酸化抗體也許會導(dǎo)致背景增加,此外,因?yàn)樽陨砗?不能用于標(biāo)記的抗體系統(tǒng)。

  • 酪蛋白 和BSA作用類似,普通酪蛋白不易溶解。中性和堿性條件下帶有負(fù)電性,與同樣帶負(fù)電荷膠體金之間存在排斥力,而膜一般都是帶正電荷,會與酪蛋白有一定的吸附作用,用酪蛋白封閉效果好些。無蛋白化合物  甲醛:與PVDF膜表面的微結(jié)構(gòu)反應(yīng)或者結(jié)合,使之失去結(jié)合蛋白的疏水力或者空間結(jié)構(gòu)域。去污劑(吐溫-20):Tween-20是一種非離子型去污劑,有復(fù)性抗原的作用,與膜疏水性吸附,有很強(qiáng)的對非特異性吸附的洗脫作用,同樣可以降低蛋白間的疏水作用,可提高特異性的識別能力。

 

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